目的: 克隆大鼠GAP-43基因,构建其真核表达载体,并观察其在哺乳动物细胞COS-7中的表达。方法: 采用RT-PCR方法,以大鼠少突胶质前体细胞RNA为模板,扩增GAP-43基因,定向克隆到pEGFP-N3载体中。以Lipofectamine^TM 2000试剂转染pEGFP-N3-GAP-43表达载体至COS-7细胞中进行瞬时真核表达。以免疫荧光方法鉴定GAP-43的表达。结果: 从大鼠少突胶质前体细胞中克隆到序列正确的GAP-43全长编码序列。所构建的GAP-43质粒在COS-7细胞中获得高效表达。结论: 大鼠GAP-43基因的克隆、真核表达载体的构建及在COS-7中的表达获得成功,为进一步研究其功能,尤其是探讨其在少突胶质细胞发育中的作用奠定了基础。

目的:检测Olig1转录因子在大鼠脊髓发育过程中的表达情况。方法:选取胚胎14.5 d、18.5 d和出生后当天、出生后3 d、7 d、2周、4周及成年的大鼠脊髓，采用免疫荧光法和RT-PCR检测Olig1在脊髓的表达。结果:从胚胎14.5 d到成年大鼠的脊髓中Olig1均有表达。结论:Olig1在少突胶质细胞不同发育时期均有表达。

目的:了解蚌埠市健康人群体检中幽门螺杆菌(Hp)的感染状况。方法:免疫胶体金法检测2 283名蚌埠市健康者的血清Hp尿素酶抗体。结果:2 283名体检者中总Hp感染率为16. 1%, 其中男性Hp感染率为16. 9%, 女性Hp感染率为14. 2%, 差异无统计学意义(P0. 05);男性不同年龄组Hp感染率差异有统计学意义(P0. 01);女性不同年龄组Hp感染率差异无统计学意义(P0. 05)。男性50～59年龄组和70岁年龄组Hp感染率均高于女性, 差异有统计学意义(P0. 05)。结论:健康人群中Hp感染率较高, 故在健康人群体检中开展Hp普查, 有利于早期根治, 减少相关疾病的发生。

目的:获取人Hes1基因的启动子并对其进行活性分析。方法:以人Hela细胞基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增Hes1基因5侧翼序列,将扩增的片段与pMD18-T载体连接,然后利用双酶切进行鉴定,并送测序;将测序正确的启动子插入pGL3-Basic,双酶切并测序鉴定。将测序正确的重组DNA质粒瞬时转染宫颈癌细胞,运用双荧光素酶报告基因检测系统检测其启动子的活性。结果:PCR扩增到的人Hes1基因启动子与基因库的序列完全一致,双荧光素酶报告基因检测系统显示其在宫颈癌细胞中具有启动子活性。结论:成功得到人Hes1基因启动子并且其具有活性。

目的探究人附睾蛋白4（HE4）、糖类抗原125（CA125）结合D-二聚体的测定在卵巢癌诊断中的运用价值。方法选取经病理确诊为卵巢恶性肿瘤122例（卵巢癌组）为观察对象，另外选取经影像学诊断为卵巢良性肿瘤的病人113例（良性肿瘤组）及同期健康体检女性121名作为对照。分别测定各组血HE4、CA125及D-二聚体的水平，分析比较各项目间的差异以及三项指标分开和协同检测的诊断意义。结果血CA125和HE4水平卵巢癌组>良性肿瘤组>健康对照组（P < 0.05~P < 0.01），血D-二聚体水平卵巢癌组>良性肿瘤组和健康对照组（P < 0.01），良性肿瘤组和健康对照组差异无统计学意义（P>0.05）；不同临床分期的卵巢癌病人中血D-二聚体、CA125、HE4水平差异有统计学意义（P < 0.01）；随着卵巢癌恶性程度的增高，病人血CA125、HE4指标水平也不断升高，血D-二聚体Ⅲ期和Ⅳ期> Ⅱ期> Ⅰ期，差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01），Ⅲ期和Ⅳ期差异无统计学意义（P>0.05）；在卵巢癌诊断上，血D-二聚体、CA125、HE4单独检测时，灵敏度分别为80.33%、81.97%、63.93%。三项指标联合检测时，灵敏度可达94.26%。D-二聚体、CA125、HE4三者联合监测诊断早期卵巢癌（Ⅰ~Ⅱ期）和卵巢癌（Ⅰ~Ⅳ期）时的AUC分别为0.913和0.959，均比各指标单独检测时明显提升。结论血清D-二聚体、CA125和HE4联合监测，显著提升了卵巢癌诊断的灵敏度和诊断效能，且三项指标表达水平与卵巢癌临床分期有关。

目的探究连翘脂素(PHI)对2, 4, 6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的克罗恩病(CD)样结肠炎的治疗效果及潜在的分子机制。方法选取18只6~8周龄的野生型小鼠(C57BL/6J), 并将其随机分为对照组(WT组)、模型组(TNBS组)和PHI干预组(PHI组), 每组6只。其中TNBS组和PHI组小鼠均采用TNBS诱导CD样结肠炎模型, PHI组小鼠于造模成功后给予PHI干预(20 mg·kg^-1·d^-1, 灌胃), 而WT组和TNBS组小鼠给予等量的0.9%氯化钠溶液。干预7 d后, 采用疾病活动度指数(DAI)、体质量变化及结肠长度评估小鼠肠炎症状; 采用HE染色和炎症评分观察小鼠结肠组织炎症程度; 采用酶联免疫吸附实验检测小鼠结肠黏膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和干扰素-γ(IFN-γ)水平。使用网络药理学预测PHI作用于CD的可能机制, 并进一步采用免疫印迹法进行验证。结果PHI组小鼠DAI评分、结肠缩短程度均低于TNBS组(P < 0.01), 高于WT组(P < 0.01);PHI小鼠体质量高于TMBS组(P < 0.01), 低于WT组(P < 0.01);PHI组小鼠结肠组织学评分及肠黏膜炎症介质(TNF-α、IL-6和IFN-γ)水平均低于TNBS组(P < 0.01), 高于WT组(P < 0.01)。网络药理学分析获得PHI作用于CD的潜在靶点共63个; 生物信息学富集分析显示, PHI主要参与炎症反应的调控过程, 且可能与白细胞介素-17(IL-17)信号通路有关。免疫印迹结果显示PHI组小鼠结肠黏膜组织中IL-17、白细胞介素-17受体A及核因子-κB激活剂1表达水平较TNBS组降低, 但仍高于WT组(P < 0.05~P < 0.01)。结论PHI可改善TNBS诱导的小鼠CD样结肠炎, 这可能与其抑制IL-17信号通路有关。

目的:探讨SD大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)前后外周血T淋巴细胞亚群的动态变化。方法:取22只健康SD大鼠(雌雄各半),采用NYU脊髓损伤仪制作重物坠落SCI模型。于SCI前、SCI后1、3、5、7和14 d采外周血,用流式细胞术检测外周血淋巴细胞中CD3+T、CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞比例的变化。结果:SCI前与SCI后1、7和14 d CD3+CD8+T细胞比例均无明显变化(P0.05),而SCI后第3、5 d均高于SCI前14 d(P0.01)。SCI后1、3、5 d及7 d的CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞比例,以及CD3+CD4+/CD3+CD8+比值均明显低于SCI前(P0.01)。在SCI后14 d,上述各T细胞亚群的比例均恢复到术前水平,两时间点之间比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论:SCI后,SD大鼠总T细胞和CD4+T细胞明显降低,CD3+CD4+/CD3+CD8+下降。提示SCI后的早期阶段,可能存在T细胞功能的异常。

目的:建立检测脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠局部浸润巨噬细胞亚群的流式细胞术方法。方法:取5只健康雌性SD大鼠,采用纽约大学SCI撞击仪系统制作重物坠落SCI模型为SCI组;另设5只假手术大鼠为假手术组。SCI术后7 d收集损伤的脊髓,制备单细胞悬液,采用Percoll原液密度梯度离心法浓缩浸润的巨噬细胞。分别以CD68与CD86或CD163的不同荧光标记抗体组合作为鉴定M1和M2型巨噬细胞的标志,用流式细胞术检测损伤局部巨噬细胞亚群的变化。结果:假手术组大鼠脊髓单细胞悬液中,CD68+细胞占细胞总数的(0. 070. 02)%,CD86+细胞和CD163+细胞分别占CD68+细胞的(9. 903. 28)%和(4. 950. 17)%;而SCI组大鼠脊髓单细胞悬液中,CD68+细胞的百分比为(0. 210. 09)%,CD86+细胞和CD163+细胞分别占CD68+细胞的(18. 710. 49)%和(27. 073. 74)%,差异均有统计学意义(P0. 05～P0. 01)。结论:以小鼠抗大鼠CD68、小鼠抗大鼠CD86、小鼠抗大鼠CD163为标志,采用流式细胞术可以成功检测SCI局部浸润的M1和M2型巨噬细胞亚群。